1、腺病毒載體對(duì)目的基因的長(zhǎng)度是否有要求？

　　有要求。對(duì)E1和E3雙缺失的腺病毒載體，比如AdMax的KitC、KitD等，其總包裝的外源片斷要求小于8kb。而對(duì)于只有E1缺失或E3缺失的載體，比如KitA、KitB等，外源片斷要求小于5kb。注意，外源片斷指包括啟動(dòng)子、外源基因和polyA等在內(nèi)的整個(gè)插入片斷。

　　2、我的試驗(yàn)需要多少總量的腺病毒載體？

　　腺病毒介導(dǎo)外源基因的基因治療研究一般分為體外培養(yǎng)細(xì)胞試驗(yàn)(體外試驗(yàn))和動(dòng)物試驗(yàn)(體內(nèi)試驗(yàn))兩部分，不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)所需要的病毒量也不盡相同。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，完成一個(gè)完整的腫瘤治療實(shí)驗(yàn)需要腺病毒的病毒量總量約為3×1012VP左右.

　　3、如何提高腺病毒的活性？

　　提高腺病毒的活性，關(guān)鍵應(yīng)該是在病毒包裝過程和擴(kuò)增過程。純化過程只是去掉有缺陷的病毒和細(xì)胞碎片等容易引起機(jī)體免疫反應(yīng)的過程，如果擴(kuò)增的病毒滴度高，那么純化后就會(huì)更高的。

　　4、克隆到轉(zhuǎn)移載體的基因中的5’和3’UTRs（未翻譯區(qū)）的額外的堿基會(huì)影響蛋白表達(dá)嗎？

　　UTRs盡可能短一些，特別是在5’要避免在mRNA里形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。在起始密碼子ATG前面可以加一小段（6-9bp）的堿基序列可以增強(qiáng)目的基因的表達(dá)，比如Kozak序列(GCCGCCACCATG)。

　　5、如何判斷腺病毒載體是否能高效感染某種細(xì)胞？

　　參照文獻(xiàn)報(bào)道是簡(jiǎn)單的辦法，也可以用帶報(bào)告基因的腺病毒先行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

　　Ad5能高效感染絕大多數(shù)人類、小鼠等的體細(xì)胞（包括分裂和非分裂細(xì)胞），比如肝、肌肉、神經(jīng)組織等。但對(duì)血液系統(tǒng)來源細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞，比如乳腺癌、白血病細(xì)胞等，感染效率較低。