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不可避免，蛋白質(zhì)提取檢測試劑做定量測定

發(fā)布日期： 2019-11-15
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 　　蛋白質(zhì)提取檢測試劑適用于測定蛋白濃度在20-5000μg/ml樣品。測定前取1-2個樣做預(yù)實驗，若A測定管－A空白管﹥1.5，需將樣本用提取液稀釋后再測定，以確保測定的準確性。大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮、丁醇等有機溶劑中，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶。由于蛋白質(zhì)中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，大吸收峰在280nm波長處。在此波長范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光密度OD280nm與其濃度呈正比關(guān)系，可作定量測定。
　　自備實驗用品及儀器：
　　臺式離心機、恒溫水浴鍋、可見分光光度計、移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水。試劑組成和配制：
　　試劑A：液體50mL×1瓶，4℃保存。試劑B：液體1mL×1支，4℃保存。標準蛋白：液體2mL×1支，4℃保存。
　　工作液配制：臨用前請根據(jù)擬用工作液體積（樣本數(shù)×1mL），將試劑A和B按照50：1的比例混合，蓋緊后充分混勻。樣品中可溶性蛋白質(zhì)提?。?/div>
　　1.液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。2.組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（自備），根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水）冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即待測液。3.細菌、細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。測定操作：
　　1.分光光度計預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到562?nm，蒸餾水調(diào)零。2.工作液置于60℃水浴預(yù)熱30min。