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游離DNA提取試劑盒的操作步驟

發(fā)布日期： 2018-04-20
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游離DNA提取試劑盒專為從血清或是血漿中提取游離循環(huán)DNA而設計，該試劑盒根據(jù)樣品量分為200μl樣品的小提試劑盒以及適用樣品量為1ml,2ml,2.5ml,5ml大提試劑盒。所用樣品為新鮮血漿或是血清樣品，-80℃的凍存樣品也適用但不能反復凍融。試劑盒可有效結(jié)合血漿及血清中濃度低至50pg/ml的游離DNA片段，由于該試劑盒zui后洗脫體積可低至20μl，這一特性使試劑盒具有濃縮提取低濃度游離DNA片段的作用。提取得到DNA片段既可直接用PCR擴增，qPCR測定，二代測序（NGS）等下游分子操作，也可置于-20℃儲存?zhèn)溆?。游離DNA提取試劑盒的操作步驟 
1. 請自行準備：無水乙醇、1.5mL離心管。 
2. 取出洗滌液，按以下操作： 
a) 洗滌液A：21mL加入9mL無水乙醇；42mL加入18mL無水乙醇。 b) 洗滌液B：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。 c) 配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。 
3. 取1.5mL離心管，加入200μL樣本，4μLDNA Carrier混合均勻，加入300μL 裂解液及20μL 消化液，振蕩混勻，56℃水浴10 分鐘。
4. 加入1000μL無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響DNA的提取與后續(xù)實驗。 
5. 將吸附柱放入收集管內(nèi)，將760μL上述溶液轉(zhuǎn)入吸附柱內(nèi)，靜置2 分鐘，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液；
6. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，將剩余760μL溶液轉(zhuǎn)移至吸附柱內(nèi)，重復步驟5。 
7. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液A至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
8. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，加500μL 洗滌液B至吸附柱內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內(nèi)廢液。
9. 將吸附柱放回收集管內(nèi)，12,000 rpm 4℃離心2 分鐘，離去殘留的洗滌液。 
10. 取出吸附柱，放入新的1.5 mL 離心管內(nèi)，加入30-50 μL 洗脫液，靜置3 分鐘，12,000 rpm 4℃ 離心2 分鐘，收集DNA溶液。提取的DNA即可用于下一步實驗或-20℃保存。